作者：李勇 北京市朝陽區六里屯社區衛生服務中心(北京城建老年病醫院)

對Ru（II）配合物與BSA進行了電子吸收和熒光發射光譜研究與DNA結合方法相似，只是使用BSA代替CT-DNA。
抗菌和抗氧化評價采用3種革蘭氏陰性（大腸桿菌、傷寒沙門氏菌和銅綠假單胞菌）和3種革蘭氏陽性（黃體微球菌、枯草芽孢桿菌和巨芽孢桿菌）采用良好擴散法對所有合成的化合物進行抗菌活性檢測。簡而言之，將大約20 mL的營養瓊脂培養基倒入經過消毒過的培養皿中。細菌試驗菌在營養肉湯中培養24 h。采用各細菌微生物培養50 μL的營養肉湯培養液（1×105 CFU/mL）制備細菌草坪。用消毒的不銹鋼軟木鉆制備了直徑為5毫米的瓊脂孔。將所有化合物溶解在DMSO中，得到1 mg/mL的原液。每個孔裝載100 μL，二甲亞砜（DMSO）為陰性對照，鏈霉素（DMSO中的100μg）為陽性對照。將培養皿在37°C下孵育24小時，并檢查是否存在抑制區。測量抑制區直徑，記錄每個生物體的平均值，并以毫米為單位表示。采用肉湯稀釋法測定MIC（最低抑菌濃度）。
DPPH清除%eT?Ao樣本=Ao100，其中Ao是對照反應的吸光度，樣本是樣品的吸光度。抗壞血酸被認為是其已知的抗氧化活性的陽性對照，也被平行測試。MTT測定法標準-二甲基噻唑）二苯基四唑溴化銨測定程序采用。將細胞放置于96孔微檢測培養板中（每孔8×103個細胞），在5%二氧化碳培養箱中在37°C下培養過夜。將配合物在DMSO中溶解，用RPMI 1640稀釋，加入孔中，最終濃度在10?6~10?4m之間。添加培養基（100 μL）制備對照孔。用含有不含細胞的培養基的孔作為空白孔。培養皿在5%二氧化碳培養箱中以37°C孵育48小時。孵育完成后，在每孔中加入原液MTT染料溶液（20 μL，5 mg/mL）。4h后，加入含有N、N-二甲基甲酰胺（50 %）和十二烷基硫酸鈉（20 %）的緩沖液（100 μL），使MTT甲瓚溶解。然后在微孔板分光光度計上在490 nm波長上測量每個孔的光密度。半抑制濃度值是通過繪制復雜濃度的存活百分比圖并讀取50 %細胞相對于對照存活的濃度來確定的。每個實驗至少重復三次，以得到平均值。HeLa腫瘤細胞系為本研究的研究對象。
為了評估Ru（II）復合物的凋亡活性，將HeLa Cells 1×106培養，用Ru（II）復合物以半抑制濃度劑量處理24小時，4°C離心。然后用1 mL冰PBS（磷酸鹽緩沖鹽水）洗滌細胞2次，洗滌2 min。微球在500 μL的HEPES（4-（2-羥乙基）-1-哌嗪乙磺酸）結合緩沖液中重懸，并在4°C下洗滌5 min。將細胞重懸于70 μL的HEPES結合緩沖液中，加入5 μL的膜聯蛋白V，室溫黑暗下孵育15 min。在室溫黑暗孵育后，用流式細胞儀進行分析。
細胞周期阻滯吖啶橙是一種核酸選擇性異色染色劑，可用于細胞周期的測定。在PBS中調整濃度為1×106個細胞/mL時的細胞懸液。加入緩沖液I（20 mM檸檬酸-磷酸鹽，1 mM EDTA，0.2蔗糖，0.1 % Triton X-100）0.5 mL，4°C，攪拌懸浮并孵育10 min。加入緩沖液II（10 mM檸檬酸磷酸，0.1 M氯化鈉），AO 0.5 mL，4°C，攪拌懸浮。HeLa細胞用釕配合物處理，并用流式細胞儀進行分析。
分子對接研究分子對接用于預測兩個分子之間形成的分子間復合物的結構。將小分子與大分子對接是一項復雜而困難的任務。Accelry的發現工作室軟件在本研究中用于設計鉛分子和估計藥物和蛋白質結合復合物的對接相互作用，配體與靶標形成的鍵的數量。對于受體配體相互作用，本研究使用了發現工作室的LibDock模塊，LibDock是一種將配體到受體活性結合位點的高通量算法，也是一種站點特征對接算法。在運行LibDock之前，將配體和蛋白質原子應用于CHARMM力場。人類DNA拓撲異構酶1受體下載自RCSB PDB（PDB ID-1T8I）的晶體結構；利用發現工作室去除蛋白質的所有水分子，穩定電荷，填充缺失的殘基，生成側鏈。該受體應具有生物活性和穩定狀態。受體建成后，應確定受體內的活性位點。受體可能有許多活性位點，但應該選擇感興趣之一。釕配合物用工具繪制草圖，并用于對接到目標結合位點。研究了具有較高的得分的結果姿態，并檢測了相互作用的配體目標復合物。在虛擬篩選的過程中，利用評分函數來估計配體結合的親和力，以篩選出活性和非活性化合物。